产品名称：HiFi HotStart ReadyMix PCR Kit

产品货号：KK2601/KK2602         产品规格：100 Rxns/500 Rxns

KAPA HiFi高保真酶是二代基因工程酶，分热启动版和非热启动版，保真性强，活力超高。具有以下特点：

1）超高保真，通过大规模二代测序得出的出错率：2.8×10^-7

2）可以扩增各种复杂模板；

3）扩增片段长，扩增基因组可达15kb，质粒DNA或噬菌体DNA可达18kb；

4）扩增速度快，节省75%以上的时间；

5）KAPA高保真热启动酶，含有2中buffer，分别用于常规模板和高难度模板。

产品描述KAPA HiFi点燃了DNA聚合体是b家族的DNA聚合酶，被设计来增加对DNA的亲和力。不需要辅助蛋白或DNA结合结构域。与野生型b族DNA聚合酶相比，该酶内在的高加工性导致在产量、速度和敏感性方面的显著提高。此外，扩增长片段以及富GC-和at目标的能力也得到了显著提高。该酶与一种专有抗体结合，在*步变性之前使酶失活。这可以防止在反应设置期间的非特异性放大，增加灵敏度，并提高反应效率。在ReadyMix PCR试剂盒中，KAPA HiFi热启动DNA聚合酶以方便的2X ReadyMix格式提供，包含除引物和模板外的所有反应组分。预混合物包含KAPA HiFi热启动DNA聚合酶(每25 uL反应0.5 U)，在专用反应缓冲液中包含dNTPs(每dNTP在1倍浓度下0.3 mM)、MgCl(在1倍浓度下2.5 mM)和稳定剂。KAPA HiFi热启动ReadyMix是专为常规，高保真PCR，广泛的目标和片段大小。它提供的错误率大约比野生型标签DNA聚合酶低100倍，成功率和产量比野生型b族(校对)DNA聚合酶更高。此外，与野生型b族DNA聚合酶相比，KAPA HiFi热启动需要更短的循环时间。

1、产品表现

1）超级保真、灵敏

2）扩增复杂模板————无可匹敌

3）退火温度对条带特异性的重要性

2、PCR反应

1）推荐反应体系

2）推荐反应参数

3、应用

1）基因定点突变；2）测序；3）蛋白表

注意事项：

1）HiFi Buffer中盐离子浓度较高，影响DNA变性/退火，所以复杂模板需要较长的变性温度，5分钟；GC Buffer主要针对高GC或稳定二级结构的模板，仅当HiFi Buffer效果不佳时使用，但其会降低保真性；

2）每个循环中变性条件为：98℃20s；

3）退火温度需通过梯度PCR优化得到；根据Tm值设定的退火温度，然后若要增加灵敏度可每次提高1℃，若要提高特异性每次降低1℃；

4）推荐延伸时间：30s/kb；若模板浓度高，可降低延伸时间，但较长的延伸时间会增加实验的灵敏度和产量；

5）推荐25个或更少的循环数，若起始模板浓度低或扩增效率偏低导致产量不高，可增加至30-35个循环；

6）该体系可扩增≥10kb的目的基因片段。若实验对MgCl2有特殊要求，请进行梯度试验，每次增加或减少0.25mM；

7）根据实验要求可调整HiFi酶的浓度，范围：0.25U-1.0U/25μl；

8）末端加A，HiFi高保真酶扩增产物是平末端，若要连接到T载体上，扩增产物纯化后用KAPA Taq DNA酶进行72℃延伸，因为未纯化的产物中含有HiFi酶，其校对活性影响加A效果。

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