一步法支原体检测试剂盒 50T 现货
- 发布日期： 2021-06-15
- 更新日期： 2025-01-10
产品详请
| 产地 |
美国
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| 品牌 |
CLARK Bioscience
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| 货号 |
T102
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| 用途 |
支原体检测
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| 包装规格 |
50次/份
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| 纯度 |
＞95%%
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| 是否进口 |
是
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产品品名：一步法支原体检测试剂盒 50T 现货
产品型号：T102
产品规格： 50次/份
产品商标：美国CLARK Bioscience
产品简介：
一步式 Quickcolor 支原体检测试剂盒旨在检测细胞培养基或其他液体样品中的支原体。支原体污染是细胞培养人员头疼的问题。支原体是一种小而简单的细菌，没有细胞壁，是最普遍和最严重的细胞系污染源之一。即使在密度高达 107-9 个细胞/mL 的情况下，支原体污染也是不可见的，浊度或 pH 值没有明显变化。
事实上，细胞培养研究中最常见的支原体感染源是另一种先前被感染的培养物带入实验室。另一个主要来源是实验室工作人员，因为人类支原体仍然是细胞培养中支原体感染的主要来源。
支原体是一个问题，因为它们会导致细胞培养物发生变化，包括生长速率改变、形态变化、染色体畸变和细胞代谢改变。事实上，一个被支原体污染的细胞系由于其特性的改变而被视为不同的细胞系。
建议所有进行细胞培养的实验室定期检测支原体污染。有多种支原体检测可用，每种检测都有自己的优点和缺点。建议将三种方法（培养试验、DNA 染色和 PCR）结合用于常规检测，确保在体外不生长的支原体菌株可以通过 DNA 染色和 PCR 检测。
培养测试最敏感，几乎可以检测所有物种。然而，细胞培养基中存在的主要支原体之一，猪鼻支原体，无法通过培养方法检测到。此外，获得结果需要一个月的时间，所需的培养基复杂，保质期相对较短，必须包括活的阳性对照。
Hoechst 染色是一种通用的 DNA 染色，对支原体没有特异性。但对结果的解释可能存在问题。
PCR 提供了一种检测支原体的快速、相对高通过的方法。它既相对具有成本效益，又需要最少的培训。
使用无支原体污染的经过验证的细胞系是在生物医学研究领域生成稳健、可靠和可重复数据的先决条件。截至 2013 年年中，提交给 Nature 期刊的手稿必须附有可重复性检查表，其中一项要求研究人员提供支原体污染检测证明。
一步法Quickcolor支原体检测试剂盒简单快捷，一小时内出结果。基于特殊的等温RCA（滚环放大），反应甚至可以在水浴中进行。阳性反应可以很容易地通过颜色从粉红色变为蓝绿色来指示，这可以用肉眼判断。
该试剂盒可以检测多种支原体（例如 M. Hyorhinis，M. Fermentans，M. Arginini，M. Hominis，M. Orale，M. Salivarium，M. Pirum，Aholeplasma Laidlawii，M. Agalactiae，M. Bovis， M. Buccale，M. Arthritidis，M. Pulmonis ) 具有极高的灵敏度和特异性。上述七种支原体占细胞培养中支原体污染的 98% 以上。
储存和稳定性：
产品在 4 ℃ 下运输。收到后将所有组件储存在-20 ℃。在这些条件下，产品至少可以稳定两年。
套件组件：
1.Solution 1: 1150 μL (50 Test)
2.Solution 2: 50 μL (50 Test)
3.煮沸支原体DNA：50 μL
4.矿物油：1500 μL
使用程序：
1.样品制备：
细胞系在检测前应预培养至少 3 天。样品应来自融合度为 70-90% 的培养物。细胞培养上清液可以直接检测。
2.反应系统设置：
(1)总反应体积为25 μL。建议进行阳性和阴性对照反应。在室温或 37 ℃下解冻溶液 1 并充分混合。溶液 2 应始终保存在 -20 ℃。根据表 1 设置反应系统。
(2) 移液数次混合，每 0.2 mL PCR 管中加入 24 μL。
(3)在阳性对照管中加入1 μL支原体DNA，在试管中加入1 μL细胞培养上清液。
反应：选择以下反应方法之一：
(1)在水浴上反应。向每个管中加入 25 μL 矿物油以防止水分蒸发，并将管置于 61°C 的水浴中 60 分钟。
(2)在热循环仪PCR仪上反应。由于一般水浴温差较大，如果有PCR仪，请在PCR仪上进行反应。如果 PCR 仪的盖子可以设置为 100°C，则不需要在每个管中添加矿物油。PCR 仪设置如下：61 ℃，60 min；10 ℃，∞；盖子，100 ℃。
3.结果分析：反应后，如果反应管的溶液颜色为紫红色，则说明试样中没有支原体存在。如果反应管的溶液颜色为蓝绿色，则表明测试样品被支原体污染
实验笔记：
. 如果反应在水浴中进行，请使用水银温度计确保温度准确。
. 61°C 下的反应时间不应超过 65 分钟。
. 反应结束后，请勿打开反应管。
