产品名称：Yeasen 40301ES50 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒 现货

产品货号：40301ES50

产品品牌：Yeasen

产品规格：50Tests/盒

产品用途：细胞周期与细胞凋亡检测

英文名称：Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit

产品信息

产品描述

细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒采用了经典的碘化丙啶染色(Propidium staining,即PI staining)方法对细胞周期与细胞凋亡进行分析。

碘化丙啶 是一种双链DNA荧光染料,其嵌入双链DNA后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被PI染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,根据DNA含量的分布情况,进行细胞周期和细胞凋亡分析。

PI染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA pian段化导致部分基因组DNApian断在染色过程中丢失,因此凋亡细胞PI染色后呈现明显的弱染,即荧光强度小于1,在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰,即凋亡细胞峰。

细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。 细胞发生凋亡时,由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂,产生凋亡小体,使细胞的光散射性质发生变化。凋亡前期,染色质皱缩,细胞密度增加,前向角光散射色显著降低。凋亡后期,细胞产生凋亡小体,前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。

本试剂盒通常应用于贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测,则必须把组织消化成单细胞状态,才可以进行检测。

运输与保存方法

运输:冰袋运输。

保存方法:-20℃避光保存,有效期为2年。

【注】如果需要在短时间内多次重复使用,可以于4℃避光保存,2个月内有效。

注意事项

   1)本试剂盒需要使用流式细胞仪进行检测。

   2)细胞处理需轻柔,尽量避免人为的损伤细胞。
   3)为防止不同批次细胞在实验时所处周期不同导致重复性差,可以在实验前进行细胞的同步化处理。实验细胞应处于对数

生长期,贴壁细胞一般在50~80%汇合度时收集为宜。

4)400目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉,留下单细胞,否则会出现人为的多倍体干扰。如果没有条件过滤,请在染色前将细胞轻弹以分散,再进行染色。

   5)荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

   6)操作碘化丙啶时,应注意防护,、避免吸入。

   7)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法
1)细胞样品制备:细胞数量控制在1×105~1 × 106个。
a)贴壁细胞:小心吸除细胞培养液,用胰酶消化细胞,制备成单细胞悬液。1000 g离心5 min,沉淀细胞,弃上清,用1 mL预冷的PBS润洗细胞一次,离心收集细胞。
b)悬浮细胞:1000 g离心5 min,沉淀细胞,小心吸除上清。加入1 mL预冷的PBS,重悬细胞,再次离心收集细胞。
c)组织细胞:将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后,用0.25%的胰酶消化0.5-1 h,经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000 g离心5 min,沉淀细胞。加入约1 mL预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞。
2)细胞固定:细胞沉淀用1 mL预冷的70%乙醇轻轻混匀,4℃固定2 h以上或者过夜。接下来1000 g,离心5 min沉淀细胞后,用1 mL预冷的PBS重悬。然后再次1000 g离心5 min沉淀细胞。
3)染色:在0.5 mL染色缓冲液(40301-C)中加入10 μL 碘化丙啶储液(40301-B)和10 μLRNase A(40301-A)溶液,混匀待用。每个细胞样品加入0.5 mL配置好的碘化丙啶染色  液,轻轻混匀重悬细胞。37℃避光孵育30min,就可以进行流式检测,流式检测*在5h内完成。

【注】:配置好的PI染色液在短时间内可以4℃保存,宜当日使用。

4)流式检测和分析:细胞用400目筛网过滤,用流式细胞仪进行检测,在激发波长488 nm波长处检测,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析

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