产品组份：本产品包括以下8种明确公开组份：

DMEM/F12 base        Essential GFs

Glutamine             Transferrin

NaHCO3               Albumin

Selenium              Insulin

脂肪间充质干细胞的分离：

1. 人脂肪组织来自脂肪抽吸患者的废弃脂肪组织。

2. 无菌PBS反复漂洗除菌。

3. 将脂肪组织转移至50mL或250mL离心管，加入等体积的使用alpha-MEM配制的胶原酶溶液，使其终浓度达到0.1%（重量/体积）。

4. 37℃，摇床（120rpm）消化2小时以上。

5. 室温静置10分钟，吸除上层油滴。

6. 离心，800g，10分钟，收集消化细胞。

7. PBS洗涤一次，500g，10分钟。MSCs无血清完全培养基悬浮细胞。

8. 计细胞数，调整细胞浓度，按照5～10×10⁵/cm²底面积接种。

9. 次日观察，如无污染，继续培养至培养基颜色变黄，或贴壁细胞密度达到30%以上。补充新鲜的MSC无血清完全培养基。

10. 细胞密度达到80%左右时，按照以下步骤传代培养。

间充质干细胞的传代：

1. 吸去培养液。

2. 用1×PBS洗涤细胞2次，以去除残留的培养液。

3. 加入PBS，之后加入0.25％Trypsin-0.1%EDTA，PBS与胰蛋白酶体积比为4:1，两者总量以覆盖培养皿或培养瓶表面为宜。轻轻旋转，置37℃培养箱中消化3～5分钟。用手轻拍培养器皿的壁，显微镜下可见绝大部分细胞变圆，极少量细胞贴壁仍呈纺锤形，极少量细胞已经悬浮即可终止消化。依据不同批次胰蛋白酶活性不同，消化的时间以显微镜下观察细胞变圆为准，但是，推荐消化时间不低于3分钟。

4. 立即加入等体积的间充质干细胞完全培养液，用吸管吸取液体，反复吹打培养器皿底壁，使细胞 脱离瓶皿底壁。

5. 离心（250g，5分钟），吸去上清液。

6. 用2～3mL间充质干细胞的完全培养液重悬细胞。

7. 按照6000个细胞/cm²的密度来接种细胞。

8. 加足够的间充质干细胞的完全培养液，在37℃，5％ CO₂和 相对湿度的培养箱中培养。

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