E8725F HY STEMCELL自主研发 MSC细胞培养基 现货

产品组份：

DMEM/F12 base        Essential GFs

Glutamine             Transferrin

NaHCO3               Albumin

Selenium              Insulin

完全培养基的配制：

将完全溶解的CCGmHuM®Human MSCs Supplement Medium（10x）细胞因子添加物加入到相应体积的基础培养基中，充分混合均匀，制备成完全培养基。培养基和CCGmHuM®Human MSCs Supplement Medium（10x）细胞因子添加物的混合比例为9:1，即每9mL基础培养基需要添加1mL细胞因子添加物。

为维持添加物中细胞生长因子的活性，请将配制好的完全培养基置于4℃避光保存，储存时间不宜超过4周，1周内用完 。

人骨髓间充质干细胞培养：

1.将骨髓样品制备成单细胞悬液，推荐使用密度梯度离心法获得单个核细胞进行以下实验。

2.PBS清洗细胞两次。

3.弃上清，用完全培养基重悬细胞。

4.细胞计数，调整细胞浓度为5～7.5×106/mL。

5.根据拟采用培养瓶或培养皿的底面积，计算接种细胞总量。

6.将接种好的细胞置于5% CO2，湿度大于95%的37℃培养箱培养。根据细胞生长状况换液。

脂肪间充质干细胞的分离：

1. 人脂肪组织来自脂肪抽吸患者的废弃脂肪组织。

2. 无菌PBS反复漂洗除菌。

3. 将脂肪组织转移至50mL或250mL离心管，加入等体积的使用alpha-MEM配制的胶原酶溶液，使其终浓度达到0.1%（重量/体积）。

4. 37℃，摇床（120rpm）消化2小时以上。

5. 室温静置10分钟，吸除上层油滴。

6. 离心，800g，10分钟，收集消化细胞。

7. PBS洗涤一次，500g，10分钟。MSCs无血清完全培养基悬浮细胞。

8. 计细胞数，调整细胞浓度，按照5～10×105/cm2底面积接种。

9. 次日观察，如无污染，继续培养至培养基颜色变黄，或贴壁细胞密度达到30%以上。补充新鲜的MSC无血清完全培养基。

10. 细胞密度达到80%左右时，按照以下步骤传代培养。

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